Cuarta semana en el IBYME

Al comenzar el día agregamos timidinia tritiada a las placas incubadas la semana anterior (extendimos los tiempos del experimento para poder hacer todos los procedimientos nosotras mismas), la cual es una fuente de nucleótidos para la replicación de las células Nb2. Vale aclarar que la timidina tritiada es radiactiva por lo que se debimos trabajar con sumo cuidado, teniendo precaución de que no entrara en contacto con nuestra piel.
Luego hicimos las preparaciones necesarias para la realización de una PCR (reacción en cadena de la polimerasa). La PCR se hizo para células T47D (una línea celular específica) tratadas con compuestos adrenergicos (partiendo del RNA total de las células por medio de una reacción de retrotrascripción utilizando una encima retrotranscriptasa, se forma ADN) para obtener cDNA copia (porque es la copia de una cadena de ARNm). Para poder realizar este procedimiento, debimos primero, preparar un protocolo para la PCR del cDNA de las células T47D. Éste consistió en hacer una lista de elementos necesarios para preparar la mix (mezcla de elementos necesarios para lograr las condiciones para la reacción en cadena de la polimerasa) para la PCR y calcular los volúmenes necesarios de cada elemento (buffer, Mg2+, dNTPs, primers y oligoDT) para lograr hacer 22 eppendorfs (11 para medir prolactina y 11 para house keepper, el cual nos demostrará si la célula se encuentra en un correcto funcionamiento). Consiguientemente Luego preparamos las dos mix las cuales servirán para lograr la amplificación de la cadena de cDNA, y por último pusimos los eppendorfs en la cicladora, para amplificar la replicación de estas cadenas de cDNA (esto se logra con ciclos de distintas temperaturas en distintos periodos de tiempo)