Sexta semana en el IByME

Lo primero que hicimos cuando llegamos al laboratorio fue preparar medio de cultivo para células que sería utilizado posteriormente. Después fuimos a ver los resultados de la PCR que habíamos hecho la semana pasada. Pudimos ver únicamente la PCR a tiempo final, ya que la PCR a tiempo real no había podido ser terminada por errores de funcionamiento del equipo.
(Aclaración: los resultados de la PCR serán analizados la semana próxima porque una parte del gel no había corrido correctamente y se decidió realizarlo por segunda vez)

Cuando terminamos de ver los resultados hicimos un Western Blot para identificar proteínas en muestras de células MCF7 e IBH6. Las proteínas presentes en una célula mamaria normal son las : Erk, Stat 5 y Akt, que sirven para distintos procesos celulares como la proliferación, el movimiento y la apoptosis. Sin embargo, en una célula tumoral éstas proteínas tienen una actividad mayor.
El análisis se hizo con células sometidas a distintos tratamientos que podían activar o desactivar las proteínas (sabemos si una proteína está activa o no, porque cuando está activa se fosforila). Se sembraron células MCF7 e IBH6 en una caja de petri para un control. Luego se aplicaron los tratamientos con prolactina, con Dexmedetomidina, y, por último, con una mezcla entre las dos anteriores. A éstas muestras preparadas se les agregó un buffer que separa las células y protege a las proteínas, permitiéndonos levantar las células. Una vez levantadas, se centifugaron para obtener sólo las proteínas.

Nosotras realizamos un gel 12% de poliacrilamida (este gel nos permite separar las proteínas según su peso molecular) y luego observamos cómo se sembraban las muestras y el marcador, en las calles del gel. Una vez terminado el sembrado, conectamos los electrodos para que las proteínas se trasladaran hacia el lado positivo, y así se pudieran separar. Para terminar, se deben transferir las proteínas a una membrana, y luego incubarlas para realizar el revelado.